Autore Bruno Pacifici

Isolamento della coltura pura

Isolamento per spandimento con ansa (streak-plate method)

Isolamento per spandimento con spatola (spread-plate method)

isolamento per disseminazione (metodo delle diluizioni successive, pour-plate method)

scopo: separare da una sorgente di microflora mista (materiale naturale) colonie pure di microrganismi (cioè provenienti dalla riproduzione di cellule singole).

spandimento con ansa (strisciamento o streak-plate method)

Materiale:

- mosto in fermentazione

- una piastra di Petri contenente agar malto

-1 ansa

Procedura:

- scrivere una vostra sigla sulla piastra insieme con la data

- prelevare sterilmente con un’ansa una goccia di mosto e spanderla sulla superficie della piastra seguendo una delle due procedure schematizzate sotto:

Spandimento a quadrante (vedi anche qui):

a. depositare una goccia e spanderla in una piccola area vicino al bordo della piastra (Area1). Strisciare l’ansa delicatamente sul terreno per evitare di affondarla.

b. sterilizzare l’ansa e raffreddarla per 5 secondi

c. fare 5 o 6 strisci dell’Area 1 verso l’Area 2 rimanendo vicino al bordo della piastra

d.sterilizzare ancora l’ansa e raffreddare per 5 secondi

e. fare 6 o 7 strisci dell’Area 2 verso l’Area 3 come mostrato nella figura

f. sterilizzare l’ansa, raffreddare e fare più strisci possibili dall’Area 3 verso l’Area 4

g. sterilizzare l’ansa e riporla

Spandimento a radianti:

a. spandere la goccia in una piccola area vicino al bordo della piastra (Area 1)

b. sterilizzare l’ansa e raffreddare per 5 secondi

c. dal bordo dell’Area fare 6 o 7 strisci “a raggi” verso il lato opposto della piastra

d. sterilizzare e raffreddare l’ansa; quindi fare strisci che incrociano i precedenti in senso perpendicolare

e. sterilizzare l’ansa e riporla

-lasciare le piastre capovolte in termostato a 28ºC per 48 ore

Questo è il video relativo allo strisciamento

esempio di piastra che si ottiene con questa tecnica

spandimento con spatola (spread-plate method)

Materiale:

- mosto in fermentazione

-3 piastre di Petri contenenti agar malto

-1 bacchetta a forma di L (spatola) sterile

Procedura:

- Scrivere su ogni piastra una vostra sigla insieme con i numeri I, II, III.

- Prelevare sterilmente con un’ansa una goccia di mosto e depositarla sulla superficie della prima piastra (I). Con la spatola “spandere” la goccia su tutta la superficie dell’agar.

- la stessa spatola viene poi utilizzata in seguito per spandere ciò che è rimasto sulla spatola sulla superficie delle piastre II e III. Di conseguenza la spatola non deve assolutamente essere sterilizzata.

- Lasciare le piastre capovolte in termostato a 28ºC per 24-48 ore.

disseminazione (metodo delle diluizioni successive, pour-plate method)

Materiali: - mosto in fermentazione

- 3 piastre di Petri sterili vuote

- 3 provette contenenti agar malto fuso

- 1 ansa

Procedura:

- contrassegnare sia le provette che le piastre di Petri con una vostra sigla e con i numeri I, II, III.

- prelevare sterilmente un’ansata di mosto ed inocularla nella provetta I, agitare la provetta per distribuire uniformemente l’inoculo.

- Ripetere l’operazione indicata prima inoculando prima la provetta II con un ansata proveniente dalla provetta I e poi la III con una proveniente dalla II.

- Versare il contenuto delle provette nelle rispettive piastre di Petri. Agitare la piastra lentamente sul piano del tavolo per distribuire uniformemente la sospensione.

- Lasciare capovolta in termostato a 28ºC per 48 ore circa