Lettura dell'assorbanza a 280 nm
vantaggi: rapido, non distruttivo
svantaggi: non quantitativo, poiché il metodo è basato sull'assorbimento degli aminoacidi aromatici; i coefficienti di estinzione molare saranno quindi molto diversi da proteina a proteina. Inoltre c'è una forte interferenza degli acidi nucleici.
sensibilità: 0.2-2 mg/ml (scarsa)
Correzione per acidi nucleici: Cproteine (mg/ml) = 1,5 x A280- 0.75 x A260
Tempo : pochi minuti
metodo di Bradford
Principio: Il colorante Coomasie Blue forma composti colorati in "blu" con le proteine, tramite legami elettrostatici proteina-gruppi sulfonici del colorante in soluzione acida.
Vantaggi: rapidità (5 minuti), sensibilità
Svantaggi: qualche variabilità fra proteine diverse , campione non recuperabile perché denaturato.
Sensibilità: 2-20 μg/ml
Retta di taratura: con BSA
Lunghezza d'onda: 595 nm
metodo del biureto (interesse storico) e di Lowry
Biureto:
Principio: in soluzione alcalina lo ione Cu+2 forma complessi colorati in "blu" con i legami peptidici. Sale normalmente usato CuSO4.
Sensibilità : bassa 1 mg/ml
Lowry ® in aggiunta al sale di rame c'é il reattivo di Folin - liocalteau (fenoli) che forma compelssi colorati con Tyr a pH 10-10.5 ® soluzione alcalina
Vantaggi:riproducibilità, piccole variazioni fra proteine differenti
Svantaggi: Molte sostanze possono interferire, reazioni lente (40 minuti), campione non recuperabile perché denaturato
Sensibilità: 0.5-10 μg/ml
Retta di taratura con BSA (Albumina di Siero Bovino)
Lunghezza d'onda: 750 nm